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[Perspective]EZH2抑制剂如何“唤醒”淋巴瘤免疫微环境？——增强CAR-T疗效的新机制

歆语健康发布于 3周前

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作者导语

弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）和滤泡性淋巴瘤（FL）作为常见的非霍奇金淋巴瘤亚型，近年来在CD19靶向的CAR-T细胞疗法推动下取得了显著进展。然而，仅有约30%-40%的患者能实现长期完全缓解，多数患者仍面临复发或原发耐药的困境。这种异质性反应的背后，涉及肿瘤细胞内在低免疫原性、T细胞耗竭以及免疫抑制性微环境等多重机制。

传统上认为，EZH2突变通过表观遗传沉默关键基因促进淋巴瘤发生发展，并抑制MHC表达以削弱抗原呈递能力。但最新研究挑战了这一认知，一项发表于《Cancer Cell》的研究¹揭示，EZH2抑制不仅可逆转肿瘤免疫逃逸，还能直接增强T细胞功能，从而显著提升T细胞免疫疗法的疗效。

值得关注的是，该团队构建了高度模拟人类FL和DLBCL遗传学与免疫学特征的同源小鼠模型，并利用体内双光子成像技术首次实时观察到EZH2抑制后CAR-T细胞在肿瘤微环境中招募增加、结合时间延长、接触面积扩大。这些突破性证据不仅验证了联合策略的科学基础，也推动了两项临床试验（NCT05934838与NCT05994235）的启动，标志着从基础研究向临床转化的重要跨越。

EZH2抑制剂通过重编程免疫突触功能

增强淋巴瘤免疫原性

EZH2是组蛋白甲基转移酶，其功能获得性突变常见于生发中心来源的B细胞淋巴瘤，如FL和部分DLBCL。这类突变导致H3K27me3水平升高，进而沉默关键基因表达，使肿瘤细胞减少对T细胞帮助的依赖并逃避免疫监视。尽管EZH2抑制剂已被批准用于复发/难治性FL，但其是否影响免疫微环境尚不明确。

本研究发现，使用EZH2抑制剂处理后的淋巴瘤细胞虽未表现出直接的抗增殖效应，却显著增强了T细胞介导的杀伤作用。体外共培养实验显示，在存在T细胞的情况下，经EZH2抑制剂预处理的tFL-P6淋巴瘤细胞存活率明显下降，且CD8+T细胞数量增加、活化标志物CD44表达上调。进一步的活细胞成像证实，药物处理后淋巴瘤细胞与T细胞之间的接触时间延长，相互作用界面扩大。

转录组分析揭示，EZH2抑制广泛上调了与免疫突触相关的基因，包括黏附分子（Itgb7,Itga7）、共刺激配体（Cd86, Cd80, OX40L, ICOSL）以及趋化因子（Cxcl10, Ccl5）等。更重要的是，MHC I类和II类分子及其抗原呈递通路相关基因（如Tap1, Psmb9）也显著上调。CUT&RUN实验证实，这些基因启动子区域的H3K27me3修饰水平显著降低，表明它们是EZH2的直接靶点。

尤为关键的是，即使在MHC-I阻断抗体存在下，经EZH2抑制剂预处理的淋巴瘤细胞仍能被OT-I CD8+ T细胞有效清除，提示其恢复的T细胞互作能力超越了经典MHC限制性识别路径。这一发现说明，EZH2抑制的核心作用并非直接杀伤肿瘤，而是“重新连接”肿瘤与免疫系统的对话桥梁。

图1：EZH2抑制剂作用机制

EZH2抑制显著提升CAR-T细胞疗效

机制涵盖招募、结合与持久性三方面

鉴于T细胞浸润与功能状态直接影响免疫治疗效果，研究人员进一步评估了EZH2抑制剂联合CAR-T或双特异性抗体的协同潜力。结果显示，无论是在小鼠tFL-P6模型还是人源PDX模型中，EZH2抑制剂预处理均显著增强了CD19 CAR-T细胞对淋巴瘤的杀伤能力，且呈剂量与时间依赖性。

体内双光子活体成像提供了直观证据：在接受CAR-T输注的小鼠中，经EZH2抑制剂预处理的淋巴瘤微环境中，CAR-T细胞的募集数量翻倍，与肿瘤细胞的平均结合时间显著延长，接触表面指数（SEI）亦明显提高。这表明EZH2抑制不仅改变了肿瘤细胞本身，还优化了CAR-T与其靶标的物理互动质量。

此外，联合治疗在多个动物模型中展现出强大抗肿瘤活性。例如，在C57BL/6小鼠中，单独使用CAR-T或EZH2抑制剂仅延缓疾病进展，而两者联用则实现了完全生存与肿瘤排斥；在NSG小鼠携带OCI-LY7细胞的模型中，伐美妥司他（EZH1/2抑制剂）联合CAR-T也显著改善了肿瘤控制。

值得注意的是，该效应不受EZH2突变状态影响。在通过CRISPR-Cas9构建的同基因DLBCL细胞系中，无论EZH2为野生型或突变型，EZH2抑制剂均能增强CAR-T杀伤效果，提示其适用范围可能更广，不仅限于EZH2突变人群。

EZH2抑制防止T细胞耗竭，促进记忆表型形成

且不影响患者T细胞功能

除了改变肿瘤微环境，EZH2抑制对T细胞自身的调控作用同样关键。已有研究表明，EZH2参与调节调节性T细胞（Treg）维持、效应T细胞扩增及CD8+ T细胞记忆分化。本研究发现，预先接受EZH2抑制剂处理的小鼠来源CAR-T细胞在体内外均表现出更强的扩增能力和持续性。

流式分析显示，经药物处理的CAR-T细胞中终末耗竭PD1+CD38+CD8+ T细胞比例显著降低，同时干细胞样前体耗竭T细胞（CXCR5+）增多，记忆/效应比值趋势上升。功能检测进一步发现，这些CAR-T细胞分泌短效效应因子（如GM-CSF、IFNγ、IL-6）减少，而与记忆T细胞相关的IL-2和TNFα分泌增加，提示其向长寿记忆表型偏移。

更为重要的是，研究者收集了7名接受EZH2抑制剂治疗的B-NHL患者治疗前后血样，发现其CD8+ T细胞中初始和记忆/效应比例显著升高，且后续CAR-T制造过程中的激活、转导效率及分化状态均未受影响。这表明临床剂量下的EZH2抑制不会损害患者T细胞功能，反而可能为其后续接受CAR-T治疗创造更有利的免疫基础。

因此，EZH2抑制兼具“双向优化”优势：一方面使肿瘤更易被识别（增强免疫原性），另一方面使T细胞更具战斗力（防止耗竭、促进记忆）。

拓展阅读

一项针对B细胞淋巴瘤的临床前研究²，旨在解决EZH2抑制剂单药治疗中部分患者响应有限、且对DLBCL疗效不佳的临床痛点。研究团队在对EZH2抑制剂不敏感的B淋巴瘤细胞系（U-698-M）中，开展了针对1387个表观调控基因的CRISPR/Cas9敲除筛选，最终锁定组蛋白甲基转移酶DOT1L为关键协同靶点，并在此基础上验证了EZH2与DOT1L抑制剂联合治疗的协同抗肿瘤作用。

机制层面，联合治疗通过三重途径起效：一是表观遗传协同调控，EZH2抑制减少H3K27me3以解除PRDM1、CD138等浆细胞分化基因抑制，DOT1L抑制减少H3K79me2以下调MYC、E2F1等细胞周期基因，同时上调CDKN1A/p21阻断增殖；二是免疫微环境重塑，激活IRF7、CIITA等干扰素通路基因，恢复EZH2突变型细胞中MHCI/II抗原呈递基因低表达，改善肿瘤免疫逃逸；三是协同诱导B细胞向浆细胞分化及肿瘤细胞凋亡。

疗效验证方面，体外在多株EZH2突变/野生型生发中心B细胞来源DLBCL（GCB-DLBCL）细胞系中展现强效协同抗增殖作用；体内SU-DHL-4异种移植模型中，联合治疗显著缩瘤、延长生存期且无明显毒性；人B淋巴瘤PDX衍生细胞系（EZH2突变型NY-DB-KD、野生型NY-DB-RN）中，验证其上调MHC基因、提升浆细胞标志物CD138阳性率的效果，最终为突破EZH2抑制剂单药耐药、扩大治疗获益人群提供关键临床前依据。