近年来，随着对原发免疫性血小板减少症（ITP）发病机制的深入研究，ITP治疗药物和治疗方案不断丰富与优化使患者的预后与生活质量得到了有效改善。然而，ITP的诊断方式却较为有限。基于ITP的孤立性外周血血小板计数减少的特征，目前ITP的诊断主要通过排除其他可能引起血小板减少的疾病进行确诊1，然而在排除诊断过程中不仅可能导致误诊甚至还可能导致过度治疗，从而使患者面临多种不必要的不良反应风险。随着分子生物学技术的飞速发展，微小RNA（miRNA）作为潜在的生物标志物逐渐受到关注。近期，Garabet L等研究人员在《British Journal of Haematology》上发表的一项研究中提出，miR-199a-5p可能是ITP的诊断标志物，这一发现为ITP的早期诊断带来了新的突破2。miRNA是一类长度为19-25个核苷酸的小型非编码RNA，可以通过靶向信使RNA（mRNA）中的互补序列来调节基因表达，进而通过引发mRNA降解或翻译抑制发挥作用，是免疫系统多种生理过程的关键调节因子，并且在胞间信号传递中发挥着重要作用。既往已有研究发现，miRNA在肿瘤、动脉粥样硬化和自身免疫性疾病等多种疾病中表现出异常表达，并且还显示出在非侵入性疾病诊断和预后标志物方面的潜力。然而，miRNA在ITP诊断中的作用在不同研究中的结果存在一定差异。针对这一问题，Garabet等研究者对先前在ITP患者队列中差异表达的12种miRNA进行了验证分析。研究涉及61例ITP患者和28例健康对照，ITP患者来源于两个不同的队列：Prolong研究组和挪威ITP生物库，其中Prolong组包括24例新诊断或持续性ITP患者，患者病程均少于1年；而ITP生物库队列的患者则涵盖了不同的病程和治疗阶段。这项研究为证明miRNA在ITP中的诊断价值提供了进一步的证据。拓展阅读：
既往多项研究对miRNA在ITP中的表达差异与诊断价值进行了探索，一项在T细胞中进行的基因组广泛表达分析研究发现了22种差异表达的miRNA，其中17种与免疫系统相关的靶基因表达变化相关；另有一项在ITP患者血小板中进行的miRNA谱分析研究则表明miR-548a-5p、miR-1185-2-3p、miR-30a-3p等差异表达的miRNA还与血小板凋亡有关，然而miRNA的检测结果在不同研究中存在差异，并且在结果复现中面临挑战。
血液样本分析发现，与健康对照组相比，ITP患者队列中五种miRNA的水平显著下调，分别为miR-199a-5p（p=0.001）、miR-374-5p（p=0.009）、miR-33a-5p（p=0.010）、miR-146a-5p（p=0.026）和miR-409-3p（p=0.036）。
表1.12种miRNA在ITP患者与健康对照组中的中位值及四分位数间距（IQR）注：当p＜0.05时，差异存在统计学意义
为了进一步探讨这些miRNA在不同病程阶段的表达差异，研究者基于患者病程的长短，对Prolong组患者和ITP生物库组患者进行了亚组分析。结果发现上述五种miRNA在Prolong组ITP患者与对照组间也存在显著的表达差异，此外，相较于健康对照组，miR-130a-3p（p=0.005）和miR-766-3p（p=0.010）在Prolong组ITP患者中也显著下调。然而，只有miR-199a-5p在ITP生物库组与对照组间的差异具有统计学意义。
表2.12种miRNA在两组ITP患者与健康对照组中的IQR比较
进一步的斯皮尔曼（Spearman）相关性分析结果显示，除miR-146a-5p外，miR-199a-5p（r=0.370，p=0.004）、miR-374b-5p（r=0.338，p=0.008）、miR-33a-5p（r=0.269，p=0.038）和miR-130a-3p（r=0.260，p=0.045）均与血小板计数存在显著的正相关关系。这一发现表明，miRNA表达水平可能与ITP的血小板减少症状相关，进一步支持了它们作为潜在诊断生物标志物的可能性。此前的分析表明，相较于健康对照组，miR-199a-5p在不同病程的ITP患者中均显著下调，并且其表达水平与血小板计数呈显著正相关。通过ROC曲线分析，miR-199a-5p在整个ITP队列与健康对照组之间的曲线下面积（AUC）为0.718（95%置信区间0.599-0.836），显示出较高的特异性和灵敏度，具有较好的ITP诊断能力。miR-374b-5p和miR-33a-5p的AUC分别0.673（0.554-0.792）和0.671（0.549-0.793），也显示出一定的诊断潜力。图1.差异表达的miRNA在整体ITP队列与健康对照组间的ROC曲线
在ITP病程少于1年的患者与健康对照组之间，miR-199a-5p和miR-374b-5p的鉴别诊断能力优于miR-33a-5p，其AUC分别为0.824（0.708–0.940）和0.806（0.688–0.924），而miR-33a-5p的AUC为0.732（0.597–0.868）。图2.差异表达的miRNA在Prolong队列与对照组间的ROC曲线
此外，将miR-199a-5p、miR-374b-5p和miR-33a-5p结合应用于Prolong队列的ITP患者时，AUC进一步提高至0.865（95%CI：0.767–0.962），提示这三种miRNA的联合应用具有更强的诊断价值。拓展阅读：
miR-199a-5p和miR-374b-5p在ITP患者中的下调可能促进促炎性免疫反应，并导致促炎细胞因子IL-6和TNF-α的增加。
研究表明，miR-199a-5p能够抑制白介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子（TNF）-α的产生，并抑制转化生长因子（TGF）-β信号通路的活性，从而在免疫反应中起到重要的负向调节作用。已有研究表明，在ITP小鼠中注射miR-199a-5p外泌体能够显著提高血小板计数，并减少辅助性T细胞（Th）17/CD4+ Th细胞的比例。而Th17细胞在ITP患者中增多，并可能与调节性T细胞（Tregs）的减少共同促进Th1型免疫反应，则被认为是诱发ITP的关键机制之一；研究表明miR-374b-5p参与调控IL-17A信号通路，并与IL-6和TNF-α等促炎性细胞因子的水平呈负相关。提示，miR-199a-5p和miR-374b-5p的下调可能通过促进炎症反应，加剧免疫失调，从而导致IL-6、TNF-α等促炎细胞因子的升高。这一作用机制也可能在ITP的发病过程中发挥重要作用，为进一步研究miRNA在ITP中的潜在作用提供了新的视角。
观点评述
Garabet等人的研究为ITP的诊断提供了新的生物标志物——miRNA-199a-5p。这一发现有望突破传统的排除性诊断模式，为临床医生提供更加迅速且精准的诊断工具。然而，miRNA-199a-5p在临床应用中仍面临诸多挑战。尽管该项研究验证了miRNA-199a-5p作为ITP诊断标志物的良好潜力，但由于样本量较小且研究对象主要集中在特定人群中，因此，未来仍需通过大规模、多中心的研究来进一步验证其广泛适用性。此外，miRNA-199a-5p的具体机制也尚未完全明了，在ITP中的作用也仍需继续深入探索。尽管如此，miRNA-199a-5p为ITP的早期诊断和治疗监测提供了新的思路。随着分子生物学技术的不断进步，miRNA标志物在ITP及其他疾病中的应用前景值得期待。同时，随着检测技术的精确化，miRNA的临床应用价值也将得到进一步提升。
1. 侯明, 等. 中华血液学杂志, 2020, 41(8): 617-623.
2. Garabet L, et al. British Journal of Haematology, 2025.
